實時熒光定量PCR擴(kuò)增曲線包括基線期，指數(shù)擴(kuò)增期，線性擴(kuò)增期和擴(kuò)增平臺期，標(biāo)準(zhǔn)的曲線應(yīng)該呈典型的S型。不規(guī)則曲線可以根據(jù)曲線的具體情況來分析：1）曲線呈斜線上升原因：熱蓋失靈或熱蓋沒蓋緊，導(dǎo)致控溫不準(zhǔn)、液體揮發(fā)。解決辦法:更換儀器熱蓋或?qū)嵘w蓋緊。圖1 曲線呈斜線上升2）擴(kuò)增曲線分成兩段（斷裂）圖2擴(kuò)增曲線分成兩段（斷裂）原因：基線的終點(diǎn)大于Ct值，通常是因為模板DNA濃度偏高，CT值< 15，而基線仍然取3-15，其中包含部分?jǐn)U增信號，導(dǎo)致曲線被壓下去。解決方法：減小基線終點(diǎn)，至Ct值前4個循環(huán)，重新分析數(shù)據(jù)。3）直線擴(kuò)增曲線圖3 某些樣本出現(xiàn)直線擴(kuò)增曲線原因：探針部分降解解決辦法:建議更換試劑進(jìn)行測試。4）曲線平臺期下掉原因：蓋子沒蓋緊解決辦法:PCR反應(yīng)管蓋子蓋上后，檢查蓋子是否蓋緊。圖4 曲線平臺期下掉