假陰性判斷:造成假陰性結果的原因有很多,主要體現在FAM擴增曲線不起來,原因包括標本抑制,核酸提取失敗,基因突變以及儀器故障等。
目前國內主流PCR試劑都不帶內標監控功能,用于檢測目標基因的FAM擴增曲線既用來定量又用于定性(判斷陰陽性),因此FAM擴增曲線的好壞非常關鍵。對于此類無內標試劑,建議結合乙肝血清標志物結果(五項定量/定性結果)來判斷陰陽性,即使是FAM曲線有擴增也應該參考此結果,特別是E抗原結果。同時,對于擁有競爭性內標監控功能的試劑來說,可有以下四種情況發生:如FAM無擴增,內標有擴增:結果正常,判斷該樣本為陰性結果;如FAM無擴增,內標也無擴增:結果異常,可能原因核酸提取失敗或有抑制,一定要重復實驗;如FAM有擴增,內標有擴增:結果正常,因為待測核酸和內標在同一反應體系下擴增;如FAM有擴增,內標無擴增:結果正常,強陽性樣本會抑制內標的擴增,導致內標結果偏弱或陰性。
假陽性判斷(如何判定):臨床PCR檢測當中造成假陽性結果的情況比較少,原因包括試劑污染,氣溶膠污染,操作污染,擴增產物污染,非特異性擴增,耗材污染等,所以建議一定要做陰性對照來監控是否存在污染。
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