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如何選擇熒光定量PCR儀器?

2016-07-07 16:30

1、儀器使用的廣泛程度  

如果不是一個新出現的儀器品牌,為保證所購置的儀器有充分的可靠性,臨床PCR實驗室可以從相應儀器在國內外使用的廣泛程度來判斷。應用越是廣泛的儀器,越是經過實踐驗證的,也就越具有可靠性。

2、儀器的檢測通量(反應孔數)  

在購買定量PCR儀的時候需要根據實驗室的要求來選擇不同通量的儀器。目前市面上的熒光定量PCR儀的檢測通量小到16多到384孔,實驗室可以根據自己的檢測項目和發展狀況,選擇合適的儀器,沒必要追求最昂貴的儀器,一般來說,96孔的通量足夠用了;如需尋找新藥靶點和疾病標記等類型的實驗,則可以考慮購買384孔的儀器。

3、儀器的通道數量  

隨著醫院開展的項目越來越多,比如基因表達,單核苷酸多態性分析、高分辨率熔解曲線等,那么單通道的儀器則無法滿足實驗室的需求了,而多通道的設計則能使其更方便地檢測多重PCR檢測及其衍生的基因表達等其他分析模式。

4、耗材的開放性  

耗材如擴增反應管的開放性可能會決定日常檢測成本的高低。作為臨床PCR實驗室,在選擇實時熒光PCR儀時,可考慮這一點。不過對于檢測HCV等RNA項目的時候,盡量使用去RNAnase酶耗材。

5、硬件設計特點  

熒光定量PCR儀主要有96孔板式和離心式等,每種設計都有它的獨到之處,但也都有無法避免的缺陷。  

96孔板的熒光定量PCR儀可以容納的樣本量大,最大可至100ul,而且無需特殊的耗材。傳統的96孔板儀器多采用鹵鎢燈激發、CCD檢測。其優點在于:鹵鎢燈的光強比LED燈強,波長范圍廣,對于熒光染料的激發具有非常好的效果,性能比較穩定,使用壽命約3000個小時左右;但CCD的檢測通常會因為每個樣品孔距光源和檢測器的光程各不相同,會產生邊緣效應,對結果產生一定的影響。為了保證精確、精準的實驗結果,這類儀器在實驗過程中通常需要配合ROX校正染料,來平衡孔間差異;離心式的儀器通常選用LED激發、PMT檢測,設計上避免了邊緣效應,同時PMT檢測對熒光信號可以放大或縮小,相對于CCD檢測更加靈活,靈敏度更高;但LED的熒光強度比較弱,波長范圍也比較窄,因此,對熒光染料的激發效果不如鹵鎢燈;

6、運行速度  

在熒光定量PCR儀的眾多技術參數中,升降溫速度也是非常重要的。更快的升降溫,可以縮短反應進行的時間,而且縮短了可能的非特異性結合和反應時間,提高PCR的特異性。但是,運行速度越快,對加熱制冷模塊的要求越高,因此,穩定性是其存在的最大問題,如果在市面上經過長期考證的,穩定性好的儀器,運行速度越快,帶來的便捷越多;

7、靈活性  

在儀器基本性能得到保證的情況下,另外一方面則需要考慮儀器的靈活性,主要包括:儀器運輸的靈活性,拆卸的靈活性,軟件升級的靈活性,模塊更換的靈活性以及使用的靈活性等。